Экстракция и предварительная очистка.

2.5.5.1. Экстракция и предварительная очистка. Образец размолотого зерна массой 20 г помещают в коническую колбу объемом 250 мл и прибавляют 10 - 20 мл ацетонитрила и выдерживают 15 мин. После выдерживания прибавляют 75 мл смеси ацетонитрил - вода в соотношении 9 : 1 и экстрагируют 5 мин на ультразвуковой ванне и дополнительно 10 мин на механическом встряхивателе. Экстракцию повторяют еще два раза, используя по 50 мл смеси ацетонитрил - вода в соотношении 9 : 1 и экстрагируя 5 мин на ультразвуковой ванне и дополнительно 10 мин на механическом встряхивателе. Экстракты центрифугируют при 4000 об./мин, фильтруют в плоскодонную колбу объемом 250 мл с 5 г поваренной соли через фильтр «красная лента». Объединенный экстракт тщательно перемешивают и оставляют на 10 мин при комнатной температуре. Затем переносят содержимое колбы в делительную воронку объемом 250 мл (не растворившуюся соль оставляют в колбе) и отбрасывают выделившийся водный слой (нижний).

К объединенному экстракту в делительной воронке добавляют 50 мл гексана и интенсивно встряхивают 2 мин. После полного разделения фаз отбрасывают верхний гексановый слой. Нижний ацетонитрильный слой собирают в химический стакан объемом 200 мл и возвращают в делительную воронку. Ацетонитрильный экстракт промывают еще раз 50 мл гексана. Гексан (верхний слой) отбрасывают, а ацетонитрильную фракцию фильтруют в концентратор объемом 250 мл через слой безводного сульфата натрия. Осушитель дополнительно обмывают 10 мл ацетонитрила, который переносят в концентратор. Объединенный экстракт упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.

К сухому остатку в концентраторе добавляют 50 мл хлористого метилена последовательно порциями по 20, 20 и 10 мл, тщательно обмывают стенки концентратора и переносят экстракт в делительную воронку объемом 250 мл. Туда же добавляют 100 мл 5 %-ного раствора гидрокарбоната натрия и интенсивно встряхивают делительную воронку 2 мин. После полного разделения фаз нижний органический слой (хлористый метилен) собирают в химический стакан объемом 100 мл. К верхнему водному слою с образовавшейся эмульсией добавляют 30 мл хлористого метилена, перемешивают и выдерживают 5 мин при комнатной температуре. Нижний выделившийся слой хлористого метилена объединяют с основным экстрактом в химическом стакане и помещают объединенный экстракт в чистую делительную воронку. Верхний водный слой отбрасывают.

К объединенному экстракту в делительной воронке добавляют 50 мл 0,1 М раствора соляной кислоты и осторожно встряхивают делительную воронку 2 мин. После полного разделения фаз верхний водный слой отбрасывают. Нижний органический слой (хлористый метилен) фильтруют в концентратор объемом 250 мл через слой безводного сульфата натрия. В случае образования эмульсии к верхнему водному слою добавляют 30 мл хлористого метилена и встряхивают делительную воронку 1 мин, после полного разделения фаз нижний органический слой объединяют с экстрактом в концентраторе. Осушитель обмывают 10 мл хлористого метилена и объединяют с экстрактом. Объединенный экстракт упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.

Источник: МУК 4.1.1213-03: Определение остаточных количеств Азоксистробина (ICI A 5504) и его геометрического изомера (R-230310) в воде, почве, в плодах огурцов, томатов, ягодах винограда, в зерне и соломе зерновых колосовых культур методом высокоэффективной жидкостной хроматографии